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豬內(nèi)皮細(xì)胞(PED)簡(jiǎn)述

更新時(shí)間:2023-09-11      點(diǎn)擊次數(shù):720

豬內(nèi)皮細(xì)胞基本信息

培養(yǎng)基

DMEM-H*全培養(yǎng)基:90%DMEM-H+10%FBS

傳代方法

復(fù)蘇步驟:①凍存管從液氮或-80℃冰箱中取出放入PE手套中,迅速?zèng)]入37℃水浴鍋,搖晃凍存管加速溶解,以1min內(nèi)全部溶解為宜;②在超凈臺(tái)中將溶解好的細(xì)胞液加入到裝有9mL*全培養(yǎng)基的離心管內(nèi),1000-1200rpm離心5min,棄去上清液,用1-2mL*全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。③將細(xì)胞懸液加入到含有5-6mL*全培養(yǎng)基的T25瓶中,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
細(xì)胞傳代:①將舊培養(yǎng)液吸除,PBS清洗兩遍后,加入1-2mL胰酶(0.25%Trypsin+0.02%EDTA);②鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(可用吸管吸起些許胰酶輕輕吹打細(xì)胞層某處,肉眼可見細(xì)胞層脫落,即消化完成,否則繼續(xù)消化),直接吸掉胰酶,加入5-6mL*全培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,把細(xì)胞層吹落,吹散。③將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的T25瓶中,添加適當(dāng)?shù)?全培養(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。;④注意培養(yǎng)基pH值變化和細(xì)胞密度,定期換液(每周2-3次),待細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%時(shí),重復(fù)傳代操作或者凍存。

生長(zhǎng)條件

37℃;5%CO2+95%空氣;

生長(zhǎng)特性

貼壁生長(zhǎng)

存儲(chǔ)條件

干冰

安全等級(jí)

0

形態(tài)

上皮細(xì)胞樣,多角形




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