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選購PCR儀要進行哪些方面的篩選

更新時間:2022-12-10      點擊次數(shù):1281
  PCR儀已經(jīng)成為分子生物學、醫(yī)學、食品工業(yè)、司法科學、生物技術、環(huán)境科學、微生物學、臨床診斷、流行病學、遺傳學、基因芯片、基因檢測、基因克隆、基因表達等領域廣泛應用的一種實驗室儀器。
  PCR擴增儀直接影響臨床檢測結果的準確性、重復性、甚至工作效率。PCR儀器品牌的選擇,是首先關系到實驗進行是否出現(xiàn)故障的重要因素,你知道選購PCR儀要進行哪些篩選嗎?
  一、溫度控制
  對普通PCR儀來說,溫度控制主要是指溫度的準確性、均勻性、以及升降溫速度,對梯度PCR儀來說,除了溫度的準確性和均勻性、升降溫速度以外,還必須考慮儀器在梯度模式和標準模式下是否具有同樣的溫度特性。
  溫度的準確性是指樣品孔溫度與設定溫度的一致性,它直接關系到實驗的成敗。如果排除樣品加入過程中的問題,對于PCR反應而言最重要的莫過于溫度控制的準確性,由于PCR是一個幾何級數(shù)擴增的過程,擴增過程中退火溫度的細微變化會被放大而直接影響結果,不論是變性、退火還是延伸都需要準確控制溫度,對退火溫度而言溫控顯的尤為重要,有時1度甚至0.5度的差異也能決定實驗的成功與失敗,所謂差之毫厘,謬之千里。因而對PCR擴增儀而言溫度控制就意味著質(zhì)量。
  溫度的均勻性是指樣品孔間的溫度差異,它關系到在不同樣品孔進行反應結果的一致性。我們在實驗中發(fā)現(xiàn)有時用同樣的樣品,同樣的PCR反應程序,最后的結果竟然差異非常明顯,或許就是因為不同位置的溫度不均一性所致。一些使用過早期PCR儀的腦子格外靈光的研究人員偏愛使用PCR儀中間某幾個固定的孔,就是因為過往反復的教訓和認真的思索得出了這樣的結論,PCR儀的溫度均勻性不好,特別是最外周的樣品孔情況更差,很有可能影響實驗結果-即“位置的邊緣效應”會影響結果的可重復性。正是這種位置效應對定量PCR的結果的影響更為明顯。
  溫度控制除了精確度,還有一個廠家喜歡大力宣傳的指針-升降溫的速度。更快的升降溫速度,可以縮短反應進行的時間,而且縮短了可能的非特異性結合、反應的時間,能提高PCR反應特異性。因此從本質(zhì)而言溫控方式就從以前相對穩(wěn)定耐用的機械式轉(zhuǎn)向了升降溫更快速的半導體。除了機械本身的原因,影響升降溫速度的還有制作承托樣品管的基座模塊的材料的導熱性。
  二、儀器的功能性和人性化設計
  熱蓋:現(xiàn)在的PCR儀一般均配備熱蓋,熱蓋溫度設為105℃,使樣品管頂部的溫度達到105℃左右,蒸發(fā)的反應液就不會產(chǎn)生凝集在管蓋上而改變反應體積,這樣用戶就無需再向反應管內(nèi)加石蠟油,直接減少后繼操作的麻煩。如果是旋轉(zhuǎn)加壓的熱蓋就要特別小心,因為壓力到達時沒有明顯的提示,用戶需要根據(jù)經(jīng)驗將熱蓋旋到合適位置,不太容易掌握。如果過松,熱蓋沒有充分接觸反應管而影響結果;如果過緊,則會導致反應管變形,甚至可能造成熱蓋的機械故障。
  樣品基座:PCR反應多在0.2或者0.5的管子中進行,多數(shù)PCR儀也配備了不同的可更換樣品槽適配不同的樣品管。
  軟件:新的PCR儀都比較注重程序編寫的簡易性。大屏幕,顯示實時信息,倒計時,記憶存儲多個程序、自動斷電保護等都有助于實驗室中的復雜環(huán)境使用。
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